Оказавшись между протестантизмом и католицизмом, православие в Западной Руси боролось за выживание. Среди приходских священников лишь немногие имели достаточно образования и способностей, чтобы пропагандировать право славную веру. Что касается западнорусских монахов, то они замкнувшись за монастырскими стенами, в основном занимались переводами с греческого и латыни религиозной литературы и не проявляли активности в противостоянии другим конфессиям.

В таких условиях всю тяжесть защиты интересов православия взяли на себя миряне — как вельможи, так и простые горожане. Из православных вельмож наибольшую активность развили князь Острожский и Григорий Александрович Ходкевич. Константин Острожский основал школу высшей ступени в Остроге, где изучались церковнославянский и греческий языки, а также две типографии — одну в Остроге, а другую в Дерманском монастыре. Именно в острожской типографии в 1581 году был издан полный текст Библии на кириллице. Григорий Ходкевич поддерживал издание различных религиозных книг в Заблудове. Другие православные религиозные книги были изданы в Вильно в типографии братьев Кузьмы и Лукаша Мамоничей, которые были печатниками литовского правительства; именно в их типографии был опубликован третий статут 1588 года.

В городах православные начали организовываться в братства. Похожие объединения существовали в Западной Руси и раньше, но теперь они обрели новое качество, поскольку главной своей задачей видели религиозное просвещение. Первое подобное братство появилось во Львове в 1586 году. Два года спустя в Вильно было организовано второе. Позднее православные братства возникли в Киеве, Луцке, Минске, Витебске, Полоцке и других западнорусских городах. Они основывали школы, типографии и больницы, издавали религиозные книги. В большинстве школ в дополнение к церковнославянскому преподавались латинский и польский языки.

Среди выходцев из Восточной Руси наиболее стойко поддерживал православие князь Андрей Курбский, установивший близкие отношения с князем Острожским и братьями Мамоничами. Замечательным духовным лидером православных стал выходец из Пскова монах Артемий, который принадлежал к мистической ветви православия и следовал традициям Нила Сорского. Московский церковный собор 1554–1555 годов, осудивший Феодосия Косого (который действительно порвал с православием), обвинил Артемия в ереси, и Артемий, как и Феодосий, бежал в Литву. Здесь православие Артемия не ставилось под сомнение. Он принял активное участие в православном движении, общаясь с разными людьми и составляя много посланий. Выдающийся западнорусский православный писатель XVII века Захария Копыстенский в своей книге «Палинодия», написанной около 1622 года, говорит, что «Артемий отвратил многих людей в Литве от арианской и лютеранской ереси, и именно через него Господь не позволил русским людям в Литве принять ересь».

Нам также не следует забывать москвича Ивана Федорова, который организовал московскую типографию и возглавлял ее с 1563 по 1565 год, а во времена опричнины бежал в Литву и работал печатником русских книг — сначала в Заблудо-ве под патронажем Григория Ходкевича, затем — во Львове и, наконец, в Остроге под защитой князя Константина Острожского. Хотя Иван Федоров не был религиозным писателем, как печатник он внес огромный вклад в православное просветительское движение. Когда он работал в московской типографии, ему помогал уроженец Западной Руси Петр Мстиславец (то есть из Мстиславля). Петр бежал из Москвы вместе с Иваном, и они вместе продолжили печатать книги в Западной Руси.