Пока кардинал Виссарион пытался устроить личную жизнь Зои, в Москве Иван III стал вдовцом. Вечером 26 апреля 1467 года жена Ивана III княгиня Мария Борисовна Тверская неожиданно почувствовала себя плохо. Родив московскому князю наследника, прозванного Иваном Молодым, она ещё мечтала о потомстве. Однако мечте не суждено было сбыться. Однажды Мария Тверская обратилась к неизвестной знахарке. Та вымочила шелковый пояс в мышьяке, передала его некоей Наталье, жене дьяка Алексея Полуектова. В апрельский вечер княгиня перевязалась поясом, а к утру её нашли мёртвой. Действие яда было настолько обширным, что уже к середине дня тело вздуло так, что на нём разорвался погребальный саван. Решили не ждать третьего дня и похоронили княгиню спешно.

Несколько месяцев вдовец Иван III пытался вести следствие. Семью Полуектова, конечно, допросили с пристрастием, но оказалось, что они были только ни о чем не подозревающими исполнителями. Полуектовы отделались шестилетней опалой. В Кремле ходили разные слухи, подозревали даже мать московского князя. К зиме 1467 года, когда завершились поиски, убийц так и не нашли.