В отличие от первого часа, касающегося предельно общей утренней темы, час третий, соотносимый с девятью часами утра, имеет уже прямую связь с произошедшими в это время новозаветными событиями.

Книга Деяний говорит о Сошествии Святого Духа на апостолов так: «При наступлении дня Пятидесятницы все они были единодушно вместе. И внезапно сделался шум с неба, как бы от несущегося сильного ветра, и наполнил весь дом, где они находились. И явились им разделяющиеся языки, как бы огненные, и почили по одному на каждом из них. И исполнились все Духа Святого, и начали говорить на иных языках, как Дух давал им провещевать» (Деян. 2: 1–4). Апостол Петр, отвечая скептикам, которые слышали учеников, говорящих иными языками, и предположили, что те пьяны, замечает: «они не пьяны, как вы думаете, ибо теперь третий час дня; но это есть предреченное пророком Иоилем: „И будет в последние дни, говорит Бог, излию от Духа Моего на всякую плоть, и будут пророчествовать сыны ваши и дочери ваши; и юноши ваши будут видеть видения, и старцы ваши сновидениями вразумляемы будут“» (Деян. 2: 15–17).

Именно это событие описывает тропарь часа (они всегда касаются главной темы часа как богослужебного последования): «Господи, Пресвятого Твоего Духа / в третий час Апостолам Твоим ниспославший, / Его, Благой, не отними от нас, / но обнови в нас, молящих Тебя».

В состав третьего часа входят 16, 24 и 50-й псалмы.