Иммунологические методы. Представляют собой определение содержания гормонов по их иммунологической активности. Путем применения данной группы методом измеряются антигенные детерминанты и характеризуется концентрация гормонов. Принцип действия иммунометодов – узнавание антигенов специфическими антителами, выработанными против гормона. Данная группа методов считается недостаточно точной, в ряде случаев клиническая картина заболевания отличается от предполагаемой согласно выявленному уровню гормона в крови. При этом задействуются более точные методы.
Биологические методы. Представляют собой методы определения уровня гормона по его биологической активности. Путем применения биометодов возможно измерение функционального влияния гормонов и получение характеристики гормональной активности. Биометоды дают представление о биологической мощности гормона. Биометоды должны соответствовать ряду важных требований. Прежде всего, они должны характеризоваться высокой чувствительностью для измерения более низкого уровня гормона в плазме по сравнению с нижним уровнем «нормы», обладать стабильной воспроизводимостью, отличаться технической простотой и специфичностью для определяемых молекул или их фракций.
Методы масс-спектрометрии. Основаны на применении технологии масс-спектрометрии и жидкостного хроматографа с высоким разрешением. Данная группа методов характеризуется высокой производимостью, специфичностью, требуемой чувствительностью и воспроизводимостью.
Виды иммунологических методов:
1. Радиоиммунологическое определение гормонов в различных средах и тканях организма. Данный метод позволяет адекватно оценить функциональное состояние как эндокринной, так и других физиологических систем организма.
2. Твердофазный иммуноферментный анализ (ELISA). В качестве твердофазного носителя применяются полистироловые микропланшеты. При данном виде анализов используются конъюгаты антител с ферментом, при реакции с соответствующими составами образующие окрашенные соединения с определенными оптическими характеристиками. Применение специальных анализаторов позволяет достичь высокой точности измерений.
3. Флуоресцентный иммуноанализ. Принцип работы: применение в качестве метки редкоземельного элемента европия. Путем применения данного метода возможно определить пиктограммовые количества стероидных гормонов и концентрации 0,03–0,15 мЕд/л гиповизарных гормонов.
4. Метод усиленной люминесценции. Относится к методам люминесцентного иммуноанализа. Получил наиболее широкое применение. Принцип работы основан на усилении реакции люминесценции путем добавления люминогенного субстрата (люминол или изолюминол) и особого усилителя, увеличивающего интенсивность и продолжительность свечения. Метод характеризуется высокой чувствительностью и воспроизводимостью. Световой сигнал регистрируется люминометром, особым анализатором.