Определение белка
Осуществляется унифицированным методом с сульфациловой кислотой и на биохимическом анализаторе. Нормальное содержание белка в спинномозговой жидкости варьирует в пределах:
1) при поясничной пункции – 0,22–0,33 г/л;
2) при цистериальной пункции – 0,1–0,22 г/л;
3) при вентрикулярной пункции – 0,12–0,2 г/л.
Интенсивность получения при коагуляции белка сульфациловой кислотой пропорциональна его концентрации.
Необходимые реактивы
1. 6%-ный раствор сульфациловой кислоты.
2. 14%-ный раствор безводного сульфата натрия.
3. Стандартный раствор альбумина – 1%-ный раствор: 1,0 мл альбумина (из человеческой или бычьей сыворотки) растворяют в небольшом количестве 0,9%-ного раствора хлорида натрия в мерной колбе вместимостью 100 мл и доводят объем раствором хлорида натрия до метки. Реактив нестойкий. Для стабилизации к стандартному раствору прибавляют 1 мл 5%-ного раствора азидида натрия. В этом случае при хранении в холодильнике реактив годен к употреблению в течение 2 месяцев.
4. 1 мл раствора альбумина.
5. 0,9%-ный раствор хлорида натрия.
Специальное оборудование: фотоэлектроколориметр.
Ход исследования
Для анализа применяют свежеприготовленную смесь равных объемов 6%-ного раствора сульфациловой кислоты и 14%-ного раствора безводного сульфата натрия (рабочий раствор). В пробирку наливают 5 мл свежеприготовленного рабочего раствора и 0,5 мл ликвора. Тщательно перемешивают. Через 10 мин интенсивность помутнения измеряют на фотоэлектроколориметре в кювете с длиной оптического пути 1 см против контроля, длина волны 410–480 нм (сине-фиолетовый светофильтр). В контроль вместо реактива берут 0,9%-ный раствор хлорида натрия. Расчет ведут по калибровочному графику.
Построение калибровочного графика: из стандартного раствора готовят разведения и обрабатывают их так, как опытные. В 5 пробирок наливают 0,05; 0,1; 0,2; 0,5 и 1 мл стандартного раствора альбумина и в каждую из них доливают до объема 10 мл 0,9%-ного раствора хлорида натрия. Концентрация белка в этих растворах соответственно 0,05; 0,1; 0,2; 0,5 и 1,0 г/л.
Примечания
1. Если муть начинает оседать, перед измерением пробирку необходимо встряхнуть.
2. Перед определением целесообразно поставить реакцию Панди, и если результат реакции оценивают – 3+ или 4+, то перед началом количественного исследования ликвор надо развести изотоническим раствором хлорида натрия и при Расчете учесть степень разведения.
3. Прямолинейная зависимость при построении калибровочного графика сохраняется до 1 г/л, поэтому при более высоких концентрациях белка ликвор следует разводить.
Повышенное содержание белка отмечают при нарушении гемодинамики, воспалительных процессах, органических поражениях центральной нервной системы и оболочек мозга, при экстрамедуллярных опухолях спинного мозга. Пониженное содержание белка отмечается при гидроцефалии и повышенном образовании ликвора.
Большое практическое значение придается определению белкового индекса, отношению глобулинов к альбуминам. Белковые фракции определяются методом электрофореза.