Принцип метода
При проведении пероксидазной реакции цитоплазма лейкоцита приобретает голубую или синюю окраску.
Необходимые реактивы
Краситель – 300 мг диаминофлуорена и 130 мг флюксина В растворяют в 70 мл 95%-ного этанола. К этой смеси добавляют 11 г ацетата натрия (CH3COONa × 3Н2О), растворенного в 20 мл 0,5%-ной уксусной кислоты, и 1 мл 3%-ной перекиси водорода. Через 48 ч реактив фильтруют, и он становится годным к употреблению. Хранить его необходимо в темной, химически чистой посуде и периодически фильтровать.
Ход исследования
10 мл свежевыделенной мочи фильтруют через фильтровальную бумагу, после чего на бумагу наносят 3 капли красителя. При содержании в 1 мкл мочи более 10 лейкоцитов на месте нанесения краски появляется темно-синее пятно. Проба считается отрицательной, если пятно красного цвета, и сомнительной, если пятно голубого цвета.
Проба проста и достаточно надежна, ответ можно получить через несколько минут. Экспресс-метод выявления скрытой лейкоцитурии имеет большое значение при профилактических осмотрах, особенно детей в яслях, детских садах и школах.
При положительном значении этой пробы лейкоцитурия выявляется и всеми другими методами, используемыми для ее количественного определения.
Неорганизованный осадок мочи состоит из солей, выпавших в осадок в виде кристаллов или аморфных масс. Характер солей зависит от коллоидного состояния мочи, рН и других свойств. При кислой реакции мочи обнаруживаются:
1) мочевая кислота – полиморфные кристаллы (ромбической, шестигранной формы, вид бочонков, брусков и др.), окрашенные в желтый цвет (иногда бесцветные). Кристаллы мочевой кислоты растворяются в щелочах, не растворяются в кислотах, макроскопически в осадке мочи имеют вид золотистого песка. Кристаллы мочевой кислоты обнаруживаются при лихорадочных заболеваниях, сопровождающихся повышенным распадом тканей, при тяжелой физической нагрузке, потреблении только мясной пищи, мочекислом диатезе;
2) ураты – аморфные мочекислые соли. Располагаются кучками желтовато-коричневатого цвета. Растворяются при нагревании и при добавлении щелочей. При действии кислот (уксусной или соляной) постепенно превращаются в бесцветные кристаллы мочевой кислоты ромбической формы. Макроскопически ураты после центрифугирования имеют вид плотного кирпично-розового осадка. В таких случаях необходимо освободиться от солей, так как они мешают микроскопическому исследованию. С этой целью используют реактив Селена (4 г буры и 4 г борной кислоты растворяют в 100 мл дистиллированной воды). В центрифужную пробирку после удаления надосадочной мочи наливают реактив Селена, смешивают, центрифугируют вновь и микроскопируют осадок. Ураты в моче появляются при употреблении в пищу продуктов, содержащих нуклеиновые кислоты, а также при повышенном распаде клеток при лейкозах, опухолях;
3) щавелевокислая известь (оксалаты) встречается в кислой моче, но может быть и в моче со щелочной реакцией. Кристаллы имеют форму октаэдров («почтовых конвертов»), а также круглую или овальную форму. Растворяются в соляной кислоте, не растворяются в щелочи и уксусной кислоте. Выпадение солей щавелевокислой извести происходит при употреблении с пищей некоторых фруктов и овощей;
4) углекислый кальций обнаруживается в форме мелких шариков. Растворяется в кислотах, выделяя углекислоту.
При щелочной реакции мочи обнаруживают:
1) кислый мочекислый аммоний (в моче детей может быть при кислой реакции). Имеет форму гирь и шаров, часто с отростками. Растворяется при нагревании и в щелочах. При добавлении кислот (соляной или уксусной) образуются бесцветные ромбические кристаллы мочевой кислоты;
2) трипельфосфаты – бесцветные кристаллы в форме «гробовых крышек». Растворяются в кислотах, не растворяются в щелочах;
3) фосфаты – аморфные массы солей сероватого цвета часто вместе с трипельфосфатами. Растворяются в кислотах, не растворяются в щелочах. Макроскопически осадок белого цвета;
4) нейтральная фосфорнокислая известь – кристаллы клиновидной формы, часто располагающиеся розетками, бесцветные (иногда могут быть в моче при слабокислой реакции). Растворяются в кислотах, не растворяются в щелочах.
Особого диагностического значения неорганизованный осадок не имеет. Большое количество кристаллов мочевой кислоты и уратов встречается при лихорадочных состояниях, процессах, связанных с массивным распадом клеток (лейкозах, опухолях), при почечнокаменной болезни и др.
В патологической моче встречаются:
1) цистин. Имеет вид шестигранных бесцветных прозрачных плиток, обнаруживается при кислой реакции мочи. Растворяется в щелочах, аммиаке, минеральных кислотах. Не растворяется в уксусной кислоте, спирте, ацетоне, эфире;
2) тирозин – кристаллы в виде тонких игл, собранных в пучки. Обнаруживается в моче с кислой реакцией. Растворяется в щелочи, минеральных кислотах. Нерастворим в спирте, ацетоне, эфире;
3) лейцин – блестящие мелкие шары с радиальной и концентрической исчерченностью. Встречаются в моче с кислой реакцией. Растворяются в минеральных кислотах и щелочах. Нерастворимы в спирте, ацетоне, эфире.
Нахождение этих кристаллов имеет диагностическое значение, поэтому для распознавания их недостаточно одних морфологических признаков. Необходимо использовать все микрохимические реакции, характерные для них, так как некоторые формы этих кристаллов имеют сходство с кристаллами мочевой кислоты, жиром, нейтральной фосфорнокислой известью. Кристаллы лейцина, тирозина и цистина обнаруживаются при подострой дистрофии печени, отравлениях фосфором;
4) жирные кислоты имеют вид тонких игл, иногда собранных в пучки. Встречаются редко, при патологических процессах, сопровождающихся жировой дистрофией и распадом клеток;
5) холестерин имеет вид тонких четырехугольных бесцветных пластинок с обломанным углом. Обнаруживается при патологических процессах, сопровождающихся распадом и жировой дистрофией клеток. В моче встречается редко;
6) билирубин – кристаллы в виде мелких желтовато-коричневых иголок, складывающихся в пучки или в виде зернышек. Обнаруживается в моче с желчными пигментами. Билирубин растворяется в щелочах и хлороформе. С азотной кислотой дает зеленое окрашивание;
7) гематоидин – кристаллы в форме ромбов или иголок, которые могут складываться в пучки и звезды. Цвет золотисто-желтый. Являются продуктом распада гемоглобина. В своей молекуле не содержат железа. Образуются в некротизированной ткани, в глубине гематом и в больших участках кровоизлияний;
8) гемосидерин – золотисто-желтые аморфные зернышки, находящиеся внутри клеток (в отличие от гематоидина). Представляет продукт распада гемоглобина и дает положительную реакцию на берлинскую лазурь, так как содержит железо. Обнаруживается при внутрисосудистом гемолизе (болезнь Маркиафава—Микели);
9) липоиды обнаруживаются в поляризационном микроскопе, где они дают двоякое преломление света. Двоякопреломляющие свет капли жира (внутри- и внеклеточные) имеют вид блестящего креста на темном фоне. Обнаруживаются при нефрозах (особенно амилоидно-липоидных);
10) лекарственные кристаллы встречаются при приеме некоторых медикаментов. Кристаллы пирамидона выпадают в виде коричневатых иголок, похожих на кристаллы билирубина, но длиннее, образующих пучки и звезды. Цвет мочи при этом розовато-красноватый. Кристаллы сульфаниламидных препаратов отличаются большим полиморфизмом. Почти всегда окрашены в желтоватый цвет, имеют вид снопов, шаров, брусков и т. д. Многие из них имеют сходство с кристаллами мочевой кислоты. Распознавание их производится при помощи индикаторной бумажки.
Фильтровальную бумагу пропитывают реактивом (см. ниже), высушивают, нарезают тонкими небольшими полосками, хранят в темном месте. Полоску бумаги опускают в осадок мочи. В присутствии кристаллов сульфаниламидных препаратов бумажка дает моментальное ярко-желтое окрашивание.
Необходимые реактивы
1 г парадиметиламидобензальдегида, 2 мл концентрированной НСl, 98 мл 2,24%-ного раствора химически чистой щавелевой кислоты.